一. 儀器及試劑
儀 器：
（1）天平一臺(tái)（精度0.1mg）；
（2）恒溫水浴鍋一臺(tái)；
（3）容量瓶；
（4）試管（1.5×15cm或1.5×10cm）；
（5）微量進(jìn)樣器（5ul或10μl）一支；
（6）微量可調(diào)移液槍（1000ul）一支、吸頭多個(gè)；
（7）旋渦混勻器一臺(tái)；
（8）HPLC系統(tǒng)及氨基酸分析專用柱（4.6×250mm）；
試 劑：
（1）超純水（≥18M?·cm）；
（2）乙腈（HPLC級(jí)）；
（3）三水合醋酸鈉（分析純）；
（4）冰醋酸（分析純）；
（5）衍生試劑A和衍生試劑B溶液，至于冰箱保存（衍生試劑包對(duì)身體有害，用時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施）；
（6）正己烷（HPLC級(jí)）。

二. 流動(dòng)相的配制
流動(dòng)相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）：乙睛＝93：7
配制方法：準(zhǔn)確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中，攪拌均勻，使之溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.5；準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液 465ml和乙腈35ml，混合均勻，抽濾過(guò)0.45μm濾膜；

流動(dòng)相B：水：乙腈＝20：80
配制方法：準(zhǔn)確量取水100ml和乙腈400ml，混合均勻，抽濾過(guò)0.45μm濾膜；
三. 衍生化反應(yīng)
1.對(duì)照品溶液的制備
取17種氨基酸對(duì)照品溶液用水稀釋至原來(lái)濃度的1/10倍稀釋作為對(duì)照品。
17種氨基酸對(duì)照品溶液稀釋10倍后，各氨基酸的濃度為：

2.供試品溶液制備
精密量取/稱取供試品適量，并配制成相應(yīng)濃度的溶液備用。
3.衍生步驟
1）將恒溫水浴鍋預(yù)熱至50±1℃；
2）分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋劑稀釋至原來(lái)濃度的1/5倍；
3）精密量取上述對(duì)照品溶液1ml，置于試管中，加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml，搖勻；在50±1℃水浴中加熱45分鐘，取出，加入正己烷溶液1ml，振搖；并用孔徑為0.45μm有機(jī)膜過(guò)濾，放置30分鐘后，取澄清的下層液進(jìn)行分析試驗(yàn)；
4）供試品的衍生步驟與對(duì)照品相同；

四. 色譜條件
1.色譜柱：EXFORMMA Amino Acid，5μm，4.6×250mm；
2.梯度程序：
流動(dòng)相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）：乙睛＝93：7
流動(dòng)相B： 水：乙腈＝20：80

流速：1.0ml/min        
柱溫：40℃        
波長(zhǎng)：254nm        

進(jìn)樣量：5μl色譜圖：
氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

溶解空白：